AP最前沿急性胰腺炎与治疗靶点一
急性胰腺炎反应中Orai1抑制剂的作用”背景细胞内钙池钙离子释放增加了胰腺腺泡细胞胞浆内游离钙浓度。激素和神经递质的生理凝集导致钙离子一过性震荡性升高，介导消化酶释放。钙池储备可通过刺激钙池调控钙离子通道（SOCE）而缓慢恢复。SOCE与钙离子感受器、Stim1以及浆膜上的钙池调控钙离子通道Orai1三者的协调机制相关。然而，由于大量而持续的钙离子消耗，中毒浓度激素、神经递质或胆汁酸导致Orai1通道激活，腺泡细胞负荷过多含钙离子，从而使胰腺产生炎症。考虑到Orai1抑制剂可能可以给急性胰腺炎病人带来益处，我们设计了临床前试验来观察CalciMedica的Orai1抑制剂CM对人体和动物中钙离子的作用和病理反应，观察在雨蛙素诱导的胰腺炎大鼠病程初期使用CM后疾病的严重程度以及人体中性粒细胞的氧爆作用。方法运用Fura-2显微荧光测试技术，我们发现10μM的CM可完全阻断胰腺腺泡细胞中的SOCE，而3μM的CM阻断50%的SOCE。使用雨蛙素诱导的SD大鼠胰腺炎（每4小时皮下注射雨蛙素），我们发现对比对照组，诱导胰腺炎成功30分钟后开始每四小时注射不同剂量的CM，对胰腺炎有显著影响，包括对胰腺水肿、腺泡细胞空泡化和细胞死亡、胰蛋白酶活力能产生正向作用，并可降低髓过氧化物酶的活性和胰腺及肺组织中炎症因子的表达。用ANCOVA模型观察雨蛙素和CM的联合效应，我们发现不同剂量CM，实验组间会有不同反应。举例来说，随CM剂量的增加，雨蛙素处理的大鼠胰腺中MPO和TNF-α有很显著的差异。然而，在检测血清淀粉酶和脂肪酶时不同剂量效应组间并无差异，胰腺IL-6mRNA水平同样无差异。我们同时发现，CM可以减少25%的血清中性粒细胞中fMLP介导的氧化迸发反应，同时减少卡巴胆碱和胆汁酸介导的腺泡细胞死亡以及离体腺泡中胰蛋白酶原激活。结论实验数据表明，Orai1抑制剂对于急性胰腺炎的治疗在PACs和炎性细胞均有独立正向作用。新型小分子蛋白激酶D抑制剂在实验室胰腺炎中的治疗应用背景PKD家族，包括PKD/PKD1、PKD2和PKD3，越来越被证明在多种细胞功能调控和人体疾病中发挥作用。急性胰腺炎是潜在致死性的急性炎性疾病，迄今还没有针对分子发病机制的治疗方法。我们近期报导了PKD是实验室胰腺炎病理反应的必需酶，包括炎症反应、腺泡细胞坏死和不适宜的细胞内消化酶激活。PKD的遗传缺失或新药PKD抑制剂CID和CRT预处理能显著减弱胰腺炎的严重程度，不论是在体还是离体试验。但是，对于其作为药物治疗，我们的了解还是很有限。我们当前研究的目的是评估实验室胰腺炎初期给予PKD抑制剂CID后胰腺炎严重程度的药物疗效。方法小鼠和大鼠均用雨蛙素诱导胰腺炎（小鼠每隔7小时，50μg/kg，大鼠每隔6小时，20μg/kg，均腹腔注射），来观察胰腺炎初期PKD抑制剂治疗的潜能。我们对实验组和对照组小鼠胰腺炎早期和晚期阶段给予15mg/kg的CID，腹腔注射（即第1次和第5次雨蛙素腹腔注射后30min）。大鼠组，在第二次腹腔注射雨蛙素后腹腔注射CID（即诱导胰腺炎1.5小时后）。实验动物通常会在注射雨蛙素1小时后死亡。我们取死亡后动物的血液和胰腺组织来观察胰腺炎的病理变化，包括血清淀粉酶、胰腺坏死水肿、空泡凝集、炎性细胞浸润。结果CID药物治疗能降低87%雨蛙素介导的实验动物血清淀粉酶升高。大鼠和小鼠的胰腺组织染色标本显示CID能显著减少胰腺组织病理损伤。对比对照组，雨蛙素诱导实验组动物发生组织坏死、炎性细胞浸润、空泡凝集降低了50%-60%。结论这些研究表明PKD小分子抑制剂可以缓解急性胰腺炎的严重程度。因此，上述药物有作为急性胰腺炎治疗用药的潜力。用导管介导AAV基因转导方法研究胰腺细胞磷酸酶在ERCP术后胰腺炎中的特殊作用胰腺炎是ERCP最普遍和严重的医源性并发症。尽管现在有预防胰腺炎的措施，PEP仍是一大问题。最近我们首次研究了PEP的基本机制，发现显影剂暴露和胰腺导管内压升高导致的钙离子和钙调磷酸酶（Cn）通路异常激活。由于很多细胞核组织表达Cn，我们并不清楚哪种来源的Cn是出现胰腺炎所必须的。我们假设胰腺腺泡细胞中的Cn是出现PEP的关键。我们用导管介导AAV基因转导方法将Cre重组酶导入floxed鼠系的Cn中。首先，我们证明了在轻度和中度PEP病例中，胰腺的Cre表达各降低了35%和73%。其次，相对于假手术对照，腺泡Cn（AAV6-Ela-Cre）的缺失减少了85%PEP的发生。胰腺水肿，炎性浸润和坏死在接受显影剂暴露的AAV6-Ela-Cre注入小鼠中其发生都减少了。导管特异性Cn（AAV6-Sox9-Cre）缺失仅减少部分PEP的发生（与控制组相比减少55%）。为了检验这些发现的相关性，单一导管内Cn抑制剂FK或环孢霉素（1-10μM）和显影剂同时给药。新的制剂可以大大预防PEP，且没有副作用。这些数据证明胰腺中Cn，尤其是腺泡中的Cn是PEP发生的必要环节。这些数据支持我们在胰腺炎病人中使用Cn靶向药物。APnet最前沿报道：谢晓纯原文章权限归原作者所有，以上译文版权归译者所有，如需转载请于APnet后台留言。北京白癜风治疗医院白癫疯医院
